第七章 抗性突變株的篩選及特殊性能變異株的篩選

　　第一節(jié) 抗性突變株的篩選

　　相對比較容易，只要有10*-6頻率的突變體存在，就容易篩選出來。有一次性篩選法和階梯性篩選法兩種手段。

　　一、一次性篩選法

　　指在對出發(fā)菌株完全致死的環(huán)境中，一次性篩選出少量抗性變異株。噬菌體抗性菌株常用此方法。

　　二、階梯型篩選法

　　藥物抗性即抗藥性突變株可在培養(yǎng)基中加入一定量的藥物或?qū)w生長有抑制作用的物質(zhì)。

　　1、梯度平板法

　　2、紙片擴(kuò)散法

　　第二節(jié) 抗性噬菌體的選育

　　方法：

　　1、自然誘變  以噬菌體為篩子，敏感菌株的孢子不經(jīng)任何誘變由其自然突變?yōu)榭剐跃辍?/p>

　　2、誘發(fā)突變   敏感菌株先經(jīng)誘變因素處理，然后將處理過的孢子液分離在含有高濃度的噬菌體的平板上，經(jīng)誘變后的存活孢子中，如存在抗性變異菌株就能在此平板生長。

　　2、抗噬菌體菌株的選育程序

　　專一性噬菌體的獲得和純化——高效價(jià)噬菌體原液制備——菌株誘發(fā)突變——分離在含有噬菌體的平皿里挑取抗性菌落和搖瓶培養(yǎng)（加噬菌體）——分離到含噬菌體的平皿上挑取抗性菌落——抗性菌落特征性測試

　　三、抗性噬菌體的特性研究

　　1、抗性菌體穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

　　2、抗性菌株的產(chǎn)量性能（穩(wěn)定，不比原始低太多，與原始持平左右）

　　抗性表現(xiàn)：1、細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變，防止噬菌體吸附侵入，2、生理代謝改變，噬菌體可以吸附侵入，但不能增殖。    （無論從自然突變或誘發(fā)突變所得到的康噬菌體菌株，在用于生產(chǎn)職之前，均需經(jīng)過反復(fù)驗(yàn)證，才能使用。）

　　3、真正抗性與溶源性的區(qū)別實(shí)驗(yàn)

　　經(jīng)選育的菌——（誘導(dǎo)）加敏感菌——出現(xiàn)噬菌斑的是假抗，不出現(xiàn)的是真抗。

　　四、用于生產(chǎn)的抗性噬菌體應(yīng)具備的條件

　　1、產(chǎn)量不低于敏感株；2、不帶噬菌體（間接篩選法可以保證原始菌種不帶噬菌體）；3、穩(wěn)定好；4、不是溶源性。    （用過濾器過濾噬菌體和細(xì)菌）

　　相關(guān)鏈接：2013年自考《微生物遺傳學(xué)》考點(diǎn)