第四章 工業(yè)微生物產(chǎn)生菌的分離和篩選

　　菌種分離：將一個(gè)混雜著各種微生物的樣品通過(guò)分離技術(shù)區(qū)分開，并按照實(shí)際要求和菌株的特性采取迅速、準(zhǔn)確、有效的方法對(duì)他們進(jìn)行分離、篩選，進(jìn)而得到所需要的微生物的過(guò)程。

　　菌種的篩選和分離包括兩大部分：

　　一、從自然界分離所需要的菌株，

　　二、把分離到的野生型菌株進(jìn)一步純化并進(jìn)行代謝產(chǎn)物鑒別。

　　菌種的分離和篩選一般分為采集、富集、分離、產(chǎn)物鑒別幾個(gè)步驟。

　　菌株的來(lái)源與途徑

　　1、從菌種保藏機(jī)構(gòu)或個(gè)人購(gòu)買有關(guān)菌種，從中篩選所需菌株。

　　2、從發(fā)酵制品中分離篩選目的菌種。

　　3、從自然界中采集樣品，如土壤、水、動(dòng)植物體……，從中分離篩選。

　　菌種采樣原則：1、菌種用于生產(chǎn)的目的；2、分布特點(diǎn)；3、生理生化特征。

　　三、對(duì)工業(yè)微生物的基本要求

　　1、純種培養(yǎng)，2、穩(wěn)定的遺傳性，3、傳代方便，4、生長(zhǎng)快、易放大，5、代謝快、易產(chǎn)生目的產(chǎn)物，6、自我保護(hù)、環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)，7、產(chǎn)量高、并易與副產(chǎn)物分離。

　　第二節(jié) 含微生物樣品的富集培養(yǎng)

　　富集培養(yǎng)是在目的微生物含量較少時(shí)，根據(jù)微生物的生理特點(diǎn)設(shè)計(jì)一種選擇性培養(yǎng)基，創(chuàng)造有利的生長(zhǎng)條件，使目的微生物在更適的環(huán)境下迅速的生長(zhǎng)繁殖，數(shù)量增加，由原來(lái)自然條件下的劣勢(shì)種變成人工環(huán)境下的優(yōu)勢(shì)種，以利分離到所需的菌株。

　　一、控制培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分

　　（1）特定培養(yǎng)基：微生物對(duì)于C、N無(wú)機(jī)鹽及微生物等要求有差異，異樣型微生物只能利用有機(jī)C源，自養(yǎng)型微生物可利用CO2作為C源。

　　（2）若選用直接利用淀粉的糖化菌種可用淀粉作為C源。

　　二、控制培養(yǎng)條件

　　1、PH：細(xì)菌、放線菌偏堿（7.0——7.5）；霉菌、酵母菌偏酸（4.5——6.0）。

　　2、溫度

　　三、抑制不需要的菌類

　　第三節(jié) 微生物的分離

　　一、好氧微生物的分離

　　（一）粗放——菌落純

　　1、稀釋涂布法

　　2、劃線分離法（簡(jiǎn)便、快）

　　3、組織分離法[1、對(duì)一般有病組織的分離方法；2、食用菌孢子分離法]

　　（二）細(xì)分——菌株純、細(xì)胞純（復(fù)雜）

　　1、利用平皿的生化反應(yīng)進(jìn)行分離  [透明圈法、變色圈法、生長(zhǎng)圈法、抑菌圈法]

　　2、單細(xì)胞或單孢子分離法

　　二、通過(guò)控制營(yíng)養(yǎng)和培養(yǎng)條件進(jìn)行分離

　　三、厭氣菌的分離

　　利用平皿的生化反應(yīng)進(jìn)行分離：是一類特殊的分離培養(yǎng)基對(duì)大量混雜微生物進(jìn)行初步分離的方法。培養(yǎng)基是根據(jù)目的微生物特殊的生理特性或利用某些代謝產(chǎn)物生化反應(yīng)來(lái)設(shè)計(jì)的。

　　第四節(jié) 野生型菌株的篩選和目的產(chǎn)物的鑒別

　　野生型菌株：直接從自然界樣品中分離出來(lái)的具有一定生產(chǎn)性能的菌株，它是發(fā)生突變前的原始菌株。

　　一、初篩——[快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、不漏篩]    

　　1、快速（盡快預(yù)測(cè)所篩選的目的微生物），

　　2、經(jīng)濟(jì)（通過(guò)1次篩選得到的具有的廣泛目標(biāo)的微生物）

　　菌種初篩的方法：稀釋涂布法、稀釋平板法、劃線分離法。

　　二、復(fù)篩——一個(gè)菌株通常要重復(fù)3——5個(gè)瓶，培養(yǎng)后的發(fā)酵液采用精確分析方法測(cè)定。

　　搖瓶發(fā)酵篩選

　　三、再?gòu)?fù)篩：取復(fù)篩后發(fā)酵單位高的。

　　初篩的簡(jiǎn)化：1、平皿快速檢測(cè)法；2、從菌體形態(tài)變異分析。

　　相關(guān)鏈接：2013年自考《微生物遺傳學(xué)》考點(diǎn)